液氮冷冻研磨机提取RNA步骤探讨

 　　液氮冷冻研磨机采用电磁撞子研磨技术，将装有样品的密闭容器浸入液氮，在超低温环境下，利用电磁驱动钢制撞子往复撞击样品，快速彻底地粉碎样品。独特的研磨方式相比传统研磨，研磨时间更短，研磨样品更为精细。
液氮冷冻研磨机的设计人性化、安全高效、耐用、操作简单、准确性和重现性好、避免样品间的交叉污染，适应不同客户的各种需求，是公认的“研磨手段”，广泛应用于生物化学、动植物、医学、矿物学、材料科学等领域。
液氮冷冻研磨提取RNA该如何进行？一起来看看：
1.用75%酒精对实验操作台、移液枪、枪头盒、管架进行消毒。
2.取出-80℃冰箱保存的组织块，放于用液氮预冷过的研钵中，敲碎一小块组织，其余放回冻存管。
3.加入液氮，先轻轻敲碎组织到最小块，再研磨成粉末，直到看不到组织块。
4.加入液氮使粉末凝聚成团，马上用药勺把粉末转移到2.0ml EP管中。
5.待液氮挥发干后，加入1ml Trizol裂解液，用1ml移液器将细胞吹散开，保证细胞裂解充分，必要时可借助水平振荡器混匀。
6.4℃离心机12000rpm离心5分钟，弃沉淀。
7.加入CHCl3，比例200ul CHCl3/ml Trizol，颠倒混匀，室温放置15分钟。
8.于4℃离心机12000g离心15分钟。取上清液，注意吸取上清是无触碰到中间层或下层。
9.取上清液，注意吸取上清是无触碰到中间层或下层。
10.加入等体积异丙醇，-20℃沉淀1小时。
11.于4℃离心机12000g离心10分钟。
12.弃上清，加入1ml 75%酒精漂洗沉淀，于4℃离心机800g离心5分钟。必要时可重复酒精洗涤。
13.弃上清，可选择再次离心去除残留的乙醇，沉淀在安全柜内晾干，切忌过干，只需目测乙醇挥发干即可。
14.根据沉淀的大小，使用无RNA酶的水将RNA沉淀充分溶解。选择溶解沉淀的体积，一般为30-100ul。测RNA浓度，此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之间。
15.电泳检测RNA完整性，0.5XTBE Buffer，110V电泳30分钟。
16.最后将沉淀保存在-80℃低温冰箱。